He aha ka hōʻailona o ke kuhi koko mele (PCR)?

ʻO ka PCR ke kū nei i ka hoʻololiʻana o ka polymerase , i keʻano o nā kinetic molepika no ka hoʻonuiʻana i nā mahele o DNA, ma o ka hanaʻana i nā kope he nui me ka hoʻohanaʻana i nā enzymes DNA polymerase ma lalo o nā kūlana i mālamaʻia. ʻOiai e like paha me kahi kope o kahi māhele DNA a iʻole gene paha e hiki ke hoʻopaʻaʻia i loko o nā miliona o nā kope, eʻaeʻia kaʻike ma ka hoʻohanaʻana i nā meaʻono a me nāʻanoʻike'ē aʻe.

Hoʻokumuʻia i ka makahiki 1983, ua hanaʻia ka hana o ka PCR e hiki ai ke hana i ka hukihula DNA a hoʻomaopopo i ke kaʻina o nā nucleotides i nā gen.

Hoʻohana ka papahana i ka holo kaʻa maʻamau a iʻole ka hoʻomaha a me ka hoʻomahaʻana o ka hopena no ka hoʻohemo DNA a me ka hoʻopiʻiʻana. I ka holoʻana o ka PCR, hoʻohanaʻia ka DNA hou e like me keʻano hoʻopihapiha no ka hoʻopiʻiʻana a me ka hoʻopiliʻana o ke kaulahao, e hoʻonui ana i ka hōʻailona DNA.

Hoʻohanaʻia nāʻano PCR ma nā māhele he nui o ka biotechnoho me ke kinikōneko , ke kinipona, nā moʻokalaleo (DNA fingerprinting), nā hōʻailona hana makua, ka hōʻailona o nā maʻi kaulike a me nā maʻi maʻi, a no ka hōʻuluʻuluʻana i nāʻano hoʻolālā.

I loko o nā maka kilokilo, ma keʻano, he pono loa ka PCR no ka mea e hoʻonui ana i ka nui o ka hōʻike DNA. Hiki ke hoʻohanaʻia hoʻi ka PCR e hōʻoia ana i ka DNA i nā makahiki he mau makahiki, a ua hoʻohanaʻia kēia mauʻano no kaʻikeʻana i nā mea a pau mai kahi mele 800,000 makahiki mai i nā'āpuni mai ke ao holoʻokoʻa.

Penei keʻano o ka PCR:

• Ka Hoʻomakaʻana: ʻO kēia kaʻina wale no ka DNA polymerases wale nō e makemake ai i ka PCR-wela. Hoʻopiʻiʻia ka hopena i waena o 94 a 96 ° C a mālamaʻia no 1-9 mau minuke.

• ʻO ka hōʻoki: Ināʻaʻole i koiʻia ke kaʻina hana i ka hoʻomakaʻana,ʻo ka hōʻanoʻana ka papa mua. Hoʻonuiʻia ka hopena i 94-98 ° C no 20-30 maukona. Hoʻopiʻiʻia ka hōʻailona DNA o ke kāhili hydrogen a hoʻohuiʻia nā mole mole DNA.
• Hoʻopiliʻia: Ua emi ka mahana kūpono i waena o 50 a 65 ° C a mālamaʻia no 20-40 maukona. ʻO nā kumu mua e pili ana i ka hoʻopili DNA hoʻokahi. He mea nui ka mahana ma kēia kaʻina. Inā ua wela loa,ʻaʻole hiki ke kau i ke kumu. Inā nui ke anu, hiki i ke kumu mua ke hoʻopaʻa paʻa loa. Hanaʻia kahi pilina maikaʻi i ka wā e pili kokoke ana ka'ōkuhi mua i ka laina hoʻopili.

• Ke Kuhi / Elongation: Keʻano o ke anawela ma kēia haʻuki ma muli o keʻano o ka polymerase. Hoʻohui ka DNA polymerase i kahi kaula DNA hou.
• Ka lōʻihi hope: E hanaʻia kēia hana ma 70-74 ° C no 5-15 mau minuke ma hope o ka holomua PCR.
• Ka hopena hope: He koho ke koho. Hoʻomaopopoʻia ka mahana i 4-15 ° C a paʻi ka hopena.

Hoʻopiliʻia ke kaʻina hana iʻekolu mau hanana:

• Ka hōʻaiaʻana o ka hōʻailona: Ma loko o nā hōʻemi, ua pālua ka hua (ka'āpana DNA i hana houʻia).
• ʻO ke kauʻana o ka halaʻana o ka DNA polymerase a hoʻopauʻia nā reagents, ua lohi ka hopena.
• Plateau: ʻAʻohe hua i loaʻa.