ʻO ka hanaʻana o ka DNA ma muli o ka hiki iā mākou ke hoʻohana i ka electrophoresis gel e hoʻokaʻawale i nā kaula o DNA i likeʻole ka nui me ka liʻiliʻi ma mua o hoʻokahi kumu kumu.
ʻO ka DNA Sequencing
I ka hopena o ka makahiki 1970, ua hanaʻia nāʻano hoʻohālikelikeʻelua o ka DNA no nā mīkini mole lōʻihi DNA. ʻO kēia keʻano o Sanger (aʻo dideoxy) a me ka Maxam-Gilbert . ʻO keʻano o Maxam-Gilbert e kauʻia ma luna o ka pilina o nucleotide-kiko'ī ma o nā kinikona a hoʻohana maikaʻiʻia i nā oligonucleotides (nā pōmene nucleotide pōkole, heʻoi aku ka liʻiliʻi ma mua o 50 mau kumuhana ma ka lōʻihi). Hoʻohanaʻia keʻano o Sanger no ka mea ua ho'āʻoʻia ma keʻano maʻalahi aʻoihana, a me ka hikiʻana mai o PCR a me ka hanaʻana i keʻano hana, hiki ke maʻalahiʻia i nā kaula lōʻihi o DNA me nā'ōnaeʻa holoʻokoʻa. Hoʻohana kēiaʻano ma ka hoʻopauʻiaʻana o nā kaula e ka dideoxynucleotides i ka manawa o ka hoʻopiʻiʻana o PCR.
Ka Hana Hana
Ma keʻano Sanger, hoʻohanaʻia kaʻili DNA e hoʻohanaʻia ma keʻano he template a hoʻohanaʻia ka DNA polymerase, i loko o ka hoʻopiʻi PCR, e hana i nā kaula me ka hoʻohanaʻana i nā alamua.
ʻEhā kūmole PCR e hoʻopihaʻia ana nā'āpana pākahi, ua loaʻa kēlā me kēia mahele o kahi o nā dideoxynucleoside triphosphate (ddNTP) analogs i kekahi o nā nucleotidesʻehā (ATP, CTP, GTP, aiʻole TTP). Hoʻomaka ke kuhi o ke kaʻina DNA hou a hiki i kahi o nā analog i hoʻohuiʻia, ai ka manawa i hoʻokomoʻoleʻia ke kaula.
E hoʻopauʻia ka hopena o ka PCR i loko o ka hoʻopiliʻana o nā lōʻihi o nā DNA, nā mea a pau e pau me ka nucleotide i kākauʻia no ka hopena. Hoʻohanaʻia ka'āpana koho electronically e hoʻokaʻawale i nā kaula o nā hāhāʻehā, ma nā ala kaʻaʻehā, a hoʻoholo i ke kaʻina o ka hoʻopilikino kumu i kauʻia ma luna o ka lōʻihi o ke kaula hope me ka nucleotide.
Ma ka hoʻopiʻi kamepiula o Sanger, hoʻohanaʻia nā hua mua i ka inoa me nā hōʻailona fluorescentʻehā. Nā hana PCR, ma ke alo o nā nucleotides o nā hoʻokeo'ē aʻe, ua hanaʻia e like me ka ho'ākākaʻana ma luna nei. Eia naʻe, ma hope aʻe, ua huiʻia nā hui huiʻehā a ua hoʻohanaʻia i kahi ala hoʻokahi o kahi gel. Hoʻokaʻawaleʻia kaʻoni o kēlā me kēia'āpana me ka mea e hana ai i ka lāʻau lili aʻikeʻia kaʻike e kahi kamepiula e hoʻopiʻi ana i nā chromatograms e hōʻike ana i nā peaks no kēlā me kēia kala, kahi i hoʻoholoʻia ai ka DNA hoʻopili.
ʻO keʻano,ʻo ka'ōnaehana hukihana automated wale nō ka pololei no nā'ōpili i ka laulima o 700-800 kumu-like i ka lōʻihi. Eia nō naʻe, hiki ke loaʻa i ka'ōnaehana piha o nā moʻo nui a, i kaʻoiaʻiʻo, keʻano o nā genomes, e hoʻohana ana i nāʻano i hanaʻia e like me ka Primer Walking a Shotgun.
I ka Primer Walking , kahi i hanaʻia o kahi nui nui e hoʻohuiʻia ana ma ka hoʻohanaʻana i keʻano Sanger. Hoʻokumuʻia nā kiʻi hou mai kahi'āpana pono o ka pūnaewele a hoʻohanaʻia e hoʻomau i ke kuhiʻana i ka mahele o ka gene i puka mai ke kikowaena o nā kumuhana mua.
Hoʻoponopono i nā'āpana o ka'āpana DNA o ka loliʻana i nā'āpana'āpana kūpono (hiki ke mālamaʻia), ke kahakiʻi i kēlā me kēia'āpana, a hoʻonohonoho i nā'āpana e pili ana i ke kaʻina. Ua maʻalahi kēia hana ma o ka hoʻohanaʻana i nā polokalamu kamepiula no ka hoʻonohonohoʻana i nā'āpana poho.