Hoʻohanaʻia kēia kiko no ka hoʻokaʻawale electrophoresis o DNA
He kūpono loa ka TBE paakiki no ka hoʻokaʻawaleʻana i nā'āpana'āpana DNA liʻiliʻi (MW <1000), e like me nā hua liʻiliʻi o nā hōʻailona enzyme palena .
Hiki i ka TBE ka mana hana nui a hāʻawi aku i kaʻilikai kūpono ma mua o ka pāpaʻa TAE . ʻO ka palemaka TAE he hopena i kūkuluʻia no ka base Tris, acetic acid and EDTA (Tris-acetate-EDTA).
Uaʻoi aku ka maikaʻi o ka TBE ma mua o ka TAE a hoʻopiʻi i ka DNga ligase, hiki ke hoʻonāʻia nā pilikia inā e hoʻoholoʻia nā hanana DNA hou a me nā ligation. Me nā papa hanaʻekolu e hahai nei, e aʻo pehea e hana ai i ka palemana TBE. ʻAʻole pono e hoʻonui i kahi 30 mau minuke e hana i kēia kiko. Eia keʻano:
E hoʻomākaukau i kahi Waiwai Kūʻai o EDTA
Pono e hoʻomākaukau kahi EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) i mua o ka manawa. ʻAʻole e holo pololei ka EDTA i ka hopena a hiki i ka hoʻoponoponoʻana o ka pH i kahi 8.0. No ka solution 500-milliliter stock stock o 0.5 M EDTA, e paʻi 93.05 grams o ka salt disodium EDTA (FW = 372.2). A laila hoʻoheheʻe ia i loko o ka wai 400 miliona a hoʻopili i ka pH me ka NaOH. Ma hope o kēlā, e hoʻokiʻekiʻe i ka hopena i ka hopena hope loa o 500 milliliters.
E hoʻomākaukau i kahi kūʻai kūʻai o TBE
E hana i kahi hoʻopiʻi waiwai (5x) o TBE ma ke kauʻana he 54 g Tris base (FW = 121.14) a me 27.5 g ākea (FW = 61.83) a hoʻopauʻia i kahi 900 miliona o ka wai i hoʻopauʻia. A laila hoʻohui i 20 mililiters o 0.5 M EDTA (pH 8.0) a hoʻonā i ka hopena i ka hopena hope o ka 1 lita.
Hiki ke mālamaʻia kēiaʻoluʻolu i ke ana wela ma kahi lumi. E mālama i ke kiko i loko o nāʻekeʻeleʻele a hoʻolei inā haʻaleleʻia kahi pae.
E hoʻomākaukau i kahi Hana Hana Hana o TBE
No ka electrophoresis gel agarose, hiki ke hoʻohanaʻia kahi pahū TBE ma ke kaʻina o ka 0.5x (1:10 i ka hoʻohaunaeleʻana o ka mea i hoʻokomoʻia). E hoʻopili i ka waiwai waiwai ma ka 10x i loko o ka wai i hoʻopauʻia. ʻO ka hopena o ka hoʻoholo hopeʻana he 45 mM Tris-borate a me 1 mM EDTA. Ua makaukau ka mea mālama no ka hoʻohanaʻana i ka gel agarose .
Ka mea e pono ai
No ka mālamaʻana i kahi palani TBE, ponoʻoe i nā mea lāʻauʻehā. ʻO nā mea i koe i kēia papa inoa he mea pono. ʻO nā meaʻehā i makemakeʻia,ʻo ia ka EDOD disodium salt, ka piko Tris, ka wai boric a me ka wai i hoʻopauʻia.
No nā meaʻoihana, ponoʻoe i ka pH mika a me nā kūlana hoʻolimaʻana, e like me ke kūpono. Hoʻohi pū me ia, ponoʻoe i 600-milliliter a me nā beakers 1500-milliliter paha. Pono ke kālepaʻana i kāu mau pono e kālepa i nā hāmole a hoʻouka i nā kaomi a hoʻoulu i nā papa.
E hōʻoia i ka papa inoa ma ka lab e hoʻohana anaʻoe e loaʻa iāʻoe nā mea a pau āu e pono ai ma mua o kou hoʻomakaʻana. ʻAʻohe meaʻino aʻe ma mua o ka waihoʻana i waena o ka hoʻomākaukauʻana i kahi hopena no ka mea ua holoʻoe i waho o nā pono kūpono.
Inā kāu hana ma ke kula a i kāu wahi hana paha, e nānā me ka poʻe pono pono'ī eʻike iā lākou i nā mea a pau i loko o ke kumukūʻai. ʻO ka hanaʻana pēlā e mālama ai i ka manawa a me ka ikaika i ka hopena.