Hoʻopiliʻia kēia Buke no ka Hanaʻana i ka DNA Movement
He pāʻani koʻi liʻiliʻi kēia a me ka mana haʻahaʻa haʻahaʻa. ʻO ia ke kūpono i ka electrophoresis o nā'āpana nui (> 20 kb) o ka DNA a makemakeʻia e hoʻololi pinepineʻia aiʻole e hoʻopili houʻia no nā manawa lōʻihi (> 4 h) manawa.
Me ka noʻonoʻo, hiki paha iāʻoe ke noʻonoʻo i nā pahu o ka pahū.
Hāʻawiʻia ka maʻalahi o ka mea paʻa a hiki ke hoʻokō koke i nā alapiʻi, e hoʻonui i ka manawa aʻoi paha i ka manawa hoʻokahi i ka manawa hoʻokahi. Ma ka hoʻohanaʻana i nā kuhikuhi ma lalo nei, pono i kahi 30 mau minuke e hana ai i ka papaʻa TAE. Eia keʻano:
E hoʻomākaukau i kahi Waiwai Kūʻai o EDTA
Hoʻolakoʻiaʻo EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) i mua o ka manawa. ʻAʻole e holo pono ka EDTA i kahi paneʻana a hiki i ka hoʻoponoponoʻana o ka pH i kahi 8.0. No ka solution 500-milliliter stock stock o 0.5 M EDTA, e paʻi 93.05 grams o ka salt disodium EDTA (FW = 372.2). Hoʻopiha i loko o ka wai 400-milliliters wai e hoʻopiliʻia a hoʻololi i ka pH me ka sodium hydroxy (NaOH). E piʻi i luna i ka hopena hope loa o 500 milliliters.
E Hoʻopili i kahi Waiwai Kūpaʻa o TAE
E hana i kahi hanana hanana (50x) o ka TAE ma ka heluʻana i 242 grams o Tris base (FW = 121.14) a hoʻopauʻia i kahi 750 mililiters o ka wai i hoʻopiliʻia.
E hoʻonui pono i ka 57.1 mililiters o ka waikawa glacial a 100 milliliters o 0.5 M EDTA (pH 8.0). Ma hope o kēlā, hoʻololi i ka pane i ka hopena hope loa o ka 1 liter. Hiki ke mālamaʻia kēia kumukūʻai waiwai ma kahi mahana wela. ʻAʻole i hoʻoponoponoʻia ka pH o kēia kiko a me kahi 8.5.
E hoʻomākaukau i kahi Hana Hana Hana o ka TAE
ʻO ka hopena hanaʻo 1x TAE paaki ke hanaʻia ma ka hoʻopili waleʻana i ka waiwai waiwai ma 50x i wai wai.
ʻO ka hoʻoholo hope loa he 40 mM. ʻO ka'eneke a me ka 1 EDM EDTA. Ua makaukau ka mea mālama no ka hoʻohanaʻana i ka gel agarose.
Ka mea e pono ai no ka Buffer
Ma muli o ka hanaʻana o ka papaʻa TAE wale nō kahi mea i hoʻonohonoho ponoʻia ai nā'ōlelo kuhikuhi a me ka māmā,ʻo ka nui o nā mea e pono ai no ka meaʻoiʻole ia. Ponoʻoe e makemake i ka EDTA disodium salt, Tris base, a me ice acid acetic acid.
Ma ka hanaʻana i ka mea hoʻopuka no ka mea e pono ai ka pale pH a me ka kauʻana o ka pH, e like me ke kūpono. Ponoʻoe e makemake i 600 mililita a me 1500 milliliters beakers aiʻole nā'ōmole a me nā kekona puka kiʻekiʻe. I ka hopena, ponoʻoe i ka wai i hoʻopuniʻia, e hoʻoulu i nā pahū, a hoʻoulu i nā papa.
Hoʻopiʻi
Ma hea kahi e hoʻolālā ai e hana i ka pahū - ma kahi kula, wahi hana, aiʻole kahi wahi'ē aʻe, e like me kou home? E hōʻoia i ka papa inoa ma mua o kou hoʻomakaʻana e hōʻoia i kāu mau waiwai a pau no ka pāpaʻa TAE.
Inā makemakeʻoleʻoe e uku no nā mea waiwai, makemakeʻoe e hoʻopaʻa i ka mea pale ma waho o kou home. Hiki iāʻoe ke hoʻonohonoho pono i nā pono āu e makemake ai ma ka pūnaewele a iʻole e hele i kahi hale kūʻai kūikawā no lākou.