ʻO ke kumu o ka hoʻomaʻemaʻeʻana i nā kinona e ponoʻia ma muli o ka hoʻohanaʻana i ka hopena o ka meaola.
No kekahi mau noi, ua lawa ka'āpana'āina. Eia nō naʻe, no nā hoʻohana'ē aʻe, e like me nā meaʻai a me nā mea hoʻohana lāʻau, pono ke kiʻekiʻe o ka hoʻomaʻemaʻe. No ka hoʻokōʻana i kēia mauʻano hana hoʻomaʻemaʻe i nāʻano hana maʻalahi, ma keʻano o ka hoʻomaʻemaʻeʻana.
ʻO nā hopena o ka hoʻomaʻemaʻeʻana i kēlā me kēia lawaiʻa, loaʻa i kekahiʻano o ka pohōʻai. No laila,ʻo ke kumukūʻau hoʻomaʻemaʻe o ke kalapona maikaʻi loa kahi i hoʻopaʻaʻia ai ka pae kiʻekiʻe loa o ka hoʻomaʻemaʻe ma nā ala liʻiliʻi loa. ʻO ka koho o kēlā me kēia mauʻanuʻu e hoʻohana ai e pili ana i ka nui, ka loiloi, ka solubility a me nā mea'ē aʻe o ka protein i hoʻopaʻaʻia. ʻO nāʻano o kēiaʻano ke kūpono loa no ka hoʻomaʻemaʻeʻana i kahi pūnaewele cytosolic. ʻO ka hoʻomaʻemaʻeʻana i nā complexes protein protein keʻoi aku ka paʻakikī a ke hoʻohana pinepineʻia e hoʻohanaʻia nāʻano likeʻole.
ʻO nā hana mua no ka hoʻomaʻemaʻe pale
ʻO ka hana mua i ka hoʻomaʻemaʻeʻana i nā intracellular (i loko o ke cell)ʻo ia ka hoʻomākaukauʻana i kahi'āpana'āina .
E komo i loko o ka unuhi kahi māmā paʻakiki o nā protein a pau mai ka cytoplasm cell, a me kekahi mau macromolecules hou, cofactors, a me nā meaʻai. Hiki ke hoʻohanaʻia ka huaʻai no kekahi mau noi i loko o ka biotechnology, akā, inā he pilikia ka pae, pono e ukaliʻia nā paepae hoʻomaʻemaʻe ma hope.
Hoʻomākaukauʻia nā mea hōʻiliʻili kalapili ma o ka weheʻana i nā liʻiliʻi pūnaewele i hanaʻia e ka lysis pūnaewele, i loaʻa i nā kinikona a me nā enzymes , sonication a iʻole ka Pelekane Farani. Hoʻokuʻuʻia ka hakina e ka centrifugation, a ua hoʻihoʻiʻia ka pilikua. Hiki ke loaʻa nā papa hana hoʻokiʻekiʻe o nā proteins extracellular ma ka hoʻokuʻu waleʻana i nā pūnaewele ma ka centrifugation.
No kekahi mauʻenehana biotechnology , aia kahi koi no nā enzymes hoʻoheheʻe : Enzymes hiki keʻae i nā mahana wela me kaʻole e hōʻike, a oiai e mālama ana i kahi hana maʻamau. ʻO nā mea i hanaʻia i kekahi manawa, i kapaʻia he extremophiles. ʻO kahi maʻalahi i ka hoʻomaʻemaʻeʻana i ke kinowai a me ka wela ke hoʻopukaʻana i nā meaola'ē aʻe i loko o ka huiʻana ma ka hoʻomehanaʻana, a laila hoʻohauleʻa i ka hopena (pēlā e hiki ai i ka enzyme hoʻololi ke hoʻololi a pale hou paha, inā pono.
Nā kūkala hoʻomaʻemaʻe waena
I ka wā i hala,ʻo ka hanaʻelua i ka hoʻomaʻemaʻeʻana i kekahi kinetona mai kahi'āpanaʻeha, aia i kahi hāmole i loko o ka hopena me ka ikaika kiʻekiʻe o ka wai (e like me ka paʻakai paʻakai). Hiki ke hoʻoneʻeʻia nā meaʻeleʻele nucleic i loko o kaʻanuʻuʻeha e nā pailaʻia i hanaʻia me ka streptomycin sulfate a me ka sulfate sulfate.
Hoʻomaopopo mauʻia ka pīpī paila me ka ammonium sulfate e like me ka paʻakai.
Hoʻololi nāʻano hoʻomalu'ē aʻe i nā hanana likeʻole o ka sulfate ammonium . Ma keʻano laulā, hoʻopukaʻia nā proteins o ke kaumaha o ka mole mole mole ma nā haʻahaʻa haʻahaʻa o ka sulfate ammonium. ʻAʻole hiki i ka paʻakai paʻakai ke alakaʻi i kahi protein i hoʻomaʻemaʻeʻia akā hiki ke kōkua i ka hoʻopauʻana i kekahi mau proteins i makemakeʻoleʻia i loko o ka huiʻana a me ka hoʻonāʻana i ka'ōpana. Hoʻopauʻia nā mūmū i loko o ka hopena e ka dialysis ma o ka pulupulu cellulose pīpī, kahi holoi, a me ka chromatography hoʻoneleʻia.
Hoʻomaʻa pinepine nā hanaʻenehana o nā'ōnaehana i nā kuki he nui i loaʻa i nāʻoihana kūʻai e hoʻomākaukau i nā mākaukau no nā papahana maʻamau. Hoʻohanaʻia ka hoʻomaʻemaʻe lapu me ka hoʻohanaʻana i nā kānana a hoʻomākaukauʻia nā kolima holoi filima. ʻO nā mea a pau āu e hana ai, e hahai i nā kuhikuhi a hoʻohui i ka'āpana pono o ka hopena maikaʻi a e kali i ka lōʻihi o ka manawa i kohiʻia ai ka meaʻelua (ka mea e puka mai ana ma kēlā hopena o ke kolamu) i loko o kahi paipili hou.
- Hiki ke hoʻohanaʻia nāʻanoʻikepili mele me nā pūnaewele luna-luna a iʻole nā pono HPLC. Hoʻokaʻawaleʻia e ka HPLC hiki ke hanaʻia ma ka hoʻololi-hoʻohālike, ka hoʻololi o ka ion, a me nāʻano hoʻokoe i ka nui, a me nā mea iʻikeʻia e ka pūnaeho diode a iʻole ke kikihana laser.
ʻO kaʻike wikiō a me kaʻike o ka hoʻomaʻemaʻeʻana
- ʻO ka chromatography huli (RPC) ke hoʻokaʻawale i nā protein e pili ana i kā lākou hydrophobicities pili. He kūlana koho nui kēiaʻano akā makemakeʻia ka hoʻohanaʻiaʻana o nā mea hoʻomehana honua. ʻO kekahi mau proteins i hoʻopau mau loaʻia e nā mea pale a e lilo i ka hana i ka wā o ka RPC. No laila,ʻaʻole i manaʻoʻia kēiaʻano no nā noi a pau, keʻole he mea pono no ka pūmua i hoʻopaʻaʻia e mālama i ka hana.
- ʻO ka chromatography Ion Ion e pili ana i ka hoʻokaʻawaleʻana o nā protein e like me ka uku . Hiki ke hoʻomākaukauʻia nā Columns no ka hoʻololi anion a iʻole ka hoʻololi kālā. Loaʻa i nā kolamu anion ka manawa kūpaʻa me kahi uku kūpono e huki ai i nā pāʻoihanaʻole. ʻO ka hoʻololiʻana i nā pou ma kaʻaoʻao hope, nā kīleʻa maikaʻiʻole i'āponoʻia i nā mea hoʻomalu. Hoʻoponoponoʻia nā kinuamua i hoʻohuiʻia ma ka hoʻololiʻana i ka pH i ke kolamu, e hopena i kahi hoʻololi a neutralization paha o nā pūʻulu hana i kauohaʻia o kēlā me kēia puʻupuʻu.
- Hiki i ka chromatography hoʻokiʻekiʻe ( ke kānana gel ) ka hoʻokaʻawaleʻana i nā proteine nui mai nā mea liʻiliʻi mai ka wā e holo wikiwiki ai nā'ōmika nunui ma o ka polymer linked with the column chromatography. ʻAʻole kūpono nā protein nui i loko o nā pores o ka polymer me ka mālamaʻana o nā mea hoʻomalu liʻiliʻi, a lōʻihi i ka heleʻana ma o ke kolamu chromatography, ma o ko lākou ala pololeiʻole. Hoʻopiliʻiaʻo Eluate i loko o keʻano o nā pua e hoʻokaʻawale ana i nā protein e pili ana i ka manawa hoʻokala. ʻO ka holoiʻana o Gel he mea hoʻohana pono no ka hoʻomauʻana i kahi hōʻailona meaolapili mai ka hoʻonuiʻiaʻana o ka pūmua i kāʻiliʻia ma kahi liʻiliʻi haʻahaʻa ma mua o ka hoʻokomo muaʻia i ka kolamu. Hiki ke hoʻohanaʻia nāʻano hoʻoheheʻeʻana i ka hoʻohanaʻana i ka protein protein nui no ko lākou kūpono.
- ʻO ka'umehana kalapili kahi kumu kūpono loa no ka "polishing" a hoʻopihaʻana paha i ka papa hana hoʻomaʻemaʻe. ʻO nā pele i loko o ka koluma chromatography e pili ana i nā ligands e hoʻopaʻa paʻa i ka pūmua o ka pahuhopu. Hoʻokuʻuʻia ke kinupona mai ke kolamu ma ka holoiʻana me kahi hanana me nā liga liʻiliʻi. Hāʻawi kēiaʻano i nā hua maikaʻi loa a me kaʻoihanaʻoi loa loa e like me nāʻano hana'ē aʻe.
- ʻO SDS-PAGE he polivopia poliacrylamide gel electrophoresis, hanaʻia ma ke alo o SDS (sodium dodecyl sulfate) e nakinaki ana i nā proteins e hāʻawi ana iā lākou i ka meaʻawaʻawa nuiʻole. Ma muli o ka likeʻana o nā pāʻani o nā protein a pau, ua hoʻokaʻawaleʻia kēiaʻano i nā mea likeʻole ma ka nui. Hoʻohana pinepineʻiaʻo SDS-PAGE i mea e hōʻoia ai i ka maʻemaʻe o ka protein ma hope o kēlā me kēia mākuhi i kahi lālā. No ka hoʻokuʻu ikiʻiaʻana o nā protein i makemakeʻoleʻia mai ka huiʻana, ua emi ka helu o nā mea iʻikeʻia ma luna o ka SDS-PAGE gel, a hiki i kahi hoʻokahi o ka hui e pani ana i ka protein i makemakeʻia.
- ʻO kaʻike ponoʻole he meaʻike i ke kinipona i hoʻohanaʻia me ka chromatography afina. ʻO nā kinaika no kahi ōmua o ke kinona ua hoʻohanaʻia ma keʻano he liʻiliʻi ma kahi kolamu chromatography. Hoʻopiliʻia ka pūmua i ka piko, a laila weheʻia ma ka holoiʻana i ke kolamu me kahi paʻakai paʻakai a iʻole nā mea'ē aʻe. ʻO nā kinikini e pili ana i nā mea hoʻohana i ke kikowaena laula a me ka hoʻopaʻaʻana i ke kīpona i kaʻikeʻia o ka protein i kāohiʻia i ka manawa e hoʻokaʻawaleʻia ana mai ke koena.
Nā kumuhana:
Zubay G. 1988. Biochemistry, 2nd Edition. Macmillan Publishing Co., New York, NY, USA.
ʻO Amersham PharmaciaʻO Biotech. 1999. Ka Paipai Paipai Hoʻolima, Hoʻopuka AB. Amersham Pharmacia Biotech Inc. New Jersey, USA. http://www.biochem.uiowa.edu/donelson/Database%20items/protein_purification_handbook.pdf.